التحقق من فاعلية استخدام نصف حجم التفاعل في مجموعة محاليل تكثير الحمض النووي الجنائي الخاص بPromega PowerPlex®c(PowerPlex®18D Systems, PowerPlex®21 System, PowerPlex®Fusion System and PowerPlex® Y23 System) المستخدمة في تحليل التكرارات المترادفة القصيرة
محتوى المقال
الملخص
من المعروف أن تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) هو الخطوة الأكثر تكلفة في عملية تضخيم الحمض النووي للفحوصات العدلية. قيمت هذه الدراسة طريقة العمل باستخدام نصف حجم التفاعل المطلوب لإجراء مضاعفة ال(DNA 12.5 ميكرولتر) باستخدام عدد مختبريه مختلفة تابعة لشركة ®Promega PowerPlex، والتي قد تساعد في تقليل تكاليف تحليل العينة بمقدار النصف وتسمح بتحليل المزيد من العينات. تم إجراء دراسة حساسية (15 نموذج) إلى جانب اختبار مختلف عينات بقع الدم (100 نموذج) التي تم استلامها من قبل مختبر شعبة العائدية والنسب في دائرة الطب العدلي في بغداد من أجل مقارنة البصمة الوراثية الناتجة عن إجراء نصف حجم التفاعل مع تلك التي نتجت باستخدام الطريقة القياسية, تم اختبار 3 طرق جنبا إلى جنب مع بروتوكول قياسي لتقييم تأثير حجم رد فعل نصف مع بعض المتغيرات. توضح النتائج أن استخدام نصف التفاعل مسبوقا بخطوة الغسل لجميع العدد المختبرية المستخدمة لإجراء تفاعل البلمرة المتسلسل يعطي نتائج قوية وموثوقة تساعد في زيادة عدد العينات التي تم تحليلها وبكلفة اقل لكل مجموعة دون المساس بجودة البصمة الوراثية التي تم الحصول عليها.
الكلمات المفتاحية
نصف حجم التفاعل، تضخيم الحمض النووي، علوم الأدلة الجنائية، Promega PowerPlex ® طقم، الدم، السمات الوراثية
التنزيلات
المراجع
Garibyan L, Avashia N. Research techniques made simple: polymerase chain reaction (PCR). The Journal of investigative dermatology. 2013 Mar;133(3):e6. https://doi.org/10.1038/jid.2013.1
Bej AK, Mahbubani MH, Atlas RM. Amplification of nucleic acids by polymerase chain reaction (PCR) and other methods and their applications. Critical reviews in biochemistry and molecular biology. 1991 Jan 1;26(3-4):301-34. https://doi.org/10.3109/10409239109114071
National Institute of Justice (NIJ), US Department of Justice, Office of Justice Programs, United States of America. Using DNA to Solve Cold Cases: Special Report.
Butts E. Exploring DNA extraction efficiency. InForensics@ NIST 2012 Meeting 2012 Nov 28.
Ensenberger MG, Hill CR, McLaren RS, Sprecher CJ, Storts DR. Developmental validation of the PowerPlex® 21 System. Forensic Science International: Genetics. 2014 Mar 1;9:169-78. https://doi.org/10.1016/j.fsigen.2013.12.005
Oostdik K, Lenz K, Nye J, Schelling K, Yet D, Bruski S, Strong J, Buchanan C, Sutton J, Linner J, Frazier N. Developmental validation of the PowerPlex® Fusion System for analysis of casework and reference samples: A 24-locus multiplex for new database standards. Forensic Science International: Genetics. 2014 Sep 1;12:69-76. https://doi.org/10.1016/j.fsigen.2014.04.013
Jain T, Shrivastava P, Bansal DD, Dash HR, Trivedi VB. PowerPlex Y23 system: a fast, sensitive and reliable Y-STR multiplex system for forensic and population genetic purpose. J Mol Biomark Diagn. 2016;7(3):1-7. https://doi.org/10.4172/2155-9929.1000281
Butler JM. Forensic DNA typing: biology & technology behind STR markers. Academic Press; 2001.
Hoffman NH, Fenger T. Validation of Half-Reaction Amplification Using Promega PowerPlex® 16. Journal of forensic sciences. 2010 Jul;55(4):1044-9. https://doi.org/10.1111/j.1556-4029.2010.01388.x
Barbaro A, Cormaci P. Validation of PowerPlex® Y23 System (promega) using reduced reaction volume. Forensic Science International: Genetics Supplement Series. 2015 Dec 1;5:e373-4. https://doi.org/10.1016/j.fsigss.2015.09.148
Iyavoo S, Cummings S, Wolejko A, Furmanczyk D, Graham R, Myers R, Haizel T. Reduced volume PCR amplification using AmpFℓSTR® Identifiler® kit. Forensic Science International: Genetics Supplement Series. 2015 Dec 1;5:e398-9. https://doi.org/10.1016/j.fsigss.2015.09.157
Akane A, Matsubara K, Nakamura H, Takahashi S, Kimura K. Identification of the heme compound copurified with deoxyribonucleic acid (DNA) from bloodstains, a major inhibitor of polymerase chain reaction (PCR) amplification. Journal of Forensic Science. 1994 Mar 1;39(2):362-72. https://doi.org/10.1520/JFS13607J
Sidstedt M, Hedman J, Romsos EL, Waitara L, Wadsö L, Steffen CR, Vallone PM, Rådström P. Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR. Analytical and bioanalytical chemistry. 2018 Apr 1;410(10):2569-83. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0931-z
تفاصيل المقال
هذا العمل مرخص بموجب Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.